大客车在凌晨两点到五点不可以在国道行驶。由于高速公路本身的较低的安全系数。夜间能见度不高司机视认性差。夜间司机的驾驶疲劳，凌晨三四点是高速公路客车事故频发时段，大客车班次被安排在了五点之后，五点之前不允许行驶。禁止大客车行驶从根本上杜绝了此时间段的交通事故。大客车人多，安全第一。长途客运车辆在凌晨2点到5点禁止在高速上行驶，但对于其他车辆没有此规定。也就是说，私家车（小车）一天24小时都是可以在高速上行驶的，没有禁行时间。法律依据；《道路旅客运输企业安全管理规范》第三十八条 客运企业在制定运输计划时应当严格遵守客运驾驶员驾驶时间和休息时间等规定。（一）日间连续驾驶时间不得超过4小时，夜间连续驾驶时间不得超过2小时，每次停车休息时间应不少于20分钟。