大巴半夜2点到5点不能上高速。根据相关法律规定，夜间在道路上行驶的客运车辆凌晨2点至5点必须就近停靠在安全地带。道路旅客运输企业应当规范运输经营行为如下：1、班线客车要严格按照许可的线路、班次、站点运行，在规定的停靠站点上下旅客，不得随意站外上客或揽客，不得超员运输。驾乘人员要对途中上车的旅客进行危险品检查，行李堆放区和乘客区要隔离，不得在行李堆放区内载客。2、客运包车要凭包车客运标志牌，按照约定的时间、起始地、目的地和线路，持包车票或包车合同运行，不得承运包车合同约定之外的旅客。驾乘人员要对旅客携带物品进行安全检查。法律依据：《道路旅客运输企业安全管理规范（试行）》第四十五条。